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外泌體

服務介紹:

外泌體是指包含了複雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種(zhǒng)細胞在正常及病理狀态下均可分泌外泌體。

早期的研究認爲,外泌體執行蛋白運輸功能(néng),特異靶定受體細胞,交換蛋白和脂類或引發(fā)下遊信号事(shì)件。直到2007年,研究人員發(fā)現外泌體也運輸核酸,參與細胞間通訊。總之,其蛋白、RNA和脂肪成(chéng)分特異,且攜帶了一些重要的信号分子,有望在多種(zhǒng)疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,這(zhè)使得外泌體的市場也在快速擴展,并成(chéng)爲熱門的研究對(duì)象。

外泌體由于攜帶的蛋白質不同,而能(néng)夠發(fā)揮不同的生物學(xué)功能(néng)。目前研究發(fā)現,外泌體内含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA,并且外泌體能(néng)夠通過(guò)生物屏障,在細胞間傳遞功能(néng)性核酸分子,從而發(fā)揮各種(zhǒng)生物學(xué)功能(néng),故外泌體有望成(chéng)爲一種(zhǒng)新型給藥途徑及基因治療載體。外泌體攜帶蛋白質包括源細胞非特異性和源細胞特異性兩(liǎng)類蛋白分子。前者可能(néng)與外泌體的生物發(fā)生和生物學(xué)作用有關,主要包括:細胞溶質蛋白、參與細胞内信号轉導的蛋白、各種(zhǒng)代謝酶、熱休克蛋白和四跨膜蛋白;另一類是特殊蛋白質,這(zhè)類蛋白質隻存在于某種(zhǒng)特殊的細胞分泌的外泌體,而這(zhè)些特定細胞源的外泌體與其生物學(xué)功能(néng)有著(zhe)密切聯系。

結果展示:

實驗流程:

1. 外泌體的提取

2. 外泌體的分析

送樣運輸要求:

1、血清樣本(幹冰運輸)

將(jiāng)收集好(hǎo)的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存(-20℃或-80℃)。

2、血漿樣本(幹冰運輸)

收集抗凝全血,輕輕颠倒充分抗凝後(hòu),可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存(-20℃或-80℃)。

3、組織樣本

取組織塊(0.1g~0.2g)最少可到2~5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭幹,準确稱重,放入5ml的勻漿管中。按重量:體積=1:9的比例加入勻漿介質或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,進(jìn)行勻漿。將(jiāng)制備好(hǎo)的勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機2500轉/分左右,離心10~15分鍾,取上清液進(jìn)行測定。制備好(hǎo)的勻漿液建議不要凍存,最好(hǎo)當天進(jìn)行測定,如放置時(shí)間過(guò)長(cháng)相關酶活會(huì)有所下降。

4、細胞樣本

貼壁細胞:用胰酶將(jiāng)細胞消化下來,或用細胞刮將(jiāng)細胞刮下來,將(jiāng)培養液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鍾,棄上清留細胞沉澱,幹冰運輸。

懸浮細胞:將(jiāng)培養液1000轉/分,離心10min。棄上清留細胞沉澱,幹冰運輸。

細胞上清:3000轉/分,離心15min取上清,上清立即用于實驗,或分裝後(hòu)于-20℃或-80℃保存。避免反複凍融。
 
 
 

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