服務介紹：

實時(shí)熒光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一種(zhǒng)以PCR反應爲基礎的DNA定量技術，通過(guò)對(duì)目标基因在擴增過(guò)程中産生的拷貝數進(jìn)行實時(shí)的定量，從而達到對(duì)目的基因的定性和定量分析。現有兩(liǎng)種(zhǒng)常用的方法對(duì)PCR産物進(jìn)行熒光定量：一種(zhǒng)是利用熒光染料與雙鏈DNA結合，通過(guò)熒光強度進(jìn)行熒光定量；另一種(zhǒng)是利用攜帶了熒光報告基因的特異性DNA探針對(duì)目标基因進(jìn)行定量。
常用熒光染料有：SYBR GreenⅠ、EvaGreen、LC Green等
Taqman熒光探針作爲定量檢測的首選，是一種(zhǒng)寡核苷酸，充當DNA複制的起(qǐ)點，熒光基團連接在探針的5'末端，淬滅劑連接在3'末端。PCR擴增時(shí)加入引物和探針，探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信号被淬滅基團吸收；PCR擴增時(shí)，探針酶切降解，報告熒光基團與淬滅熒光基團分離，熒光信号被系統檢測接收，每擴增一條DNA鏈伴随一個熒光分子形成(chéng)，實時(shí)熒光信号的累積與PCR産物同步進(jìn)行，實現實時(shí)定量的實驗結果。相對(duì)于SYBR熒光染料具有序列特異性，直結合到互補區的強靈敏度。相較于雜交探針，其隻需設計一條探針，既方便也能(néng)完成(chéng)定量PCR要求。

實驗結果展示：

引物設計實驗流程：

獲得遊離5，-羟基→合成(chéng)DNA原料→帶帽（capping）反應→轉化爲穩定磷酸三酯→重複步驟4
探針引物設計實驗流程：
目的基因查找比對(duì)→探針與引物設計→合成(chéng)

熒光定量QPCR實驗流程：
取材→RNA提取逆轉錄成(chéng)cDNA→實時(shí)熒光定量PCR-(QPCR産物電泳)→數據分析

引物設計樣品運輸要求：

基因名稱和種(zhǒng)屬、或已知探針引物序列、或基因ID号
熒光定量QPCR送樣運輸要求：
組織、細胞：-80℃保存，幹冰運輸；
血液：EDTA抗凝管，4℃運輸；
RNA樣本：體積≥10 μL，幹冰運輸。