染色質免疫共沉澱技術的原理是在活細胞狀态下固定蛋白質-DNA複合物,并將(jiāng)其随機切斷爲一定長(cháng)度範圍内的染色質小片段,然後(hòu)通過(guò)免疫學(xué)方法沉澱此複合體,特異性地富集目的蛋白結合的DNA片段,通過(guò)對(duì)目的片斷的純化與檢測,從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。這(zhè)項技術通過(guò)蛋白質與DNA互作來分析目标基因活性以及已知蛋白質的靶基因,被廣泛應用于體内轉錄調控因子與靶基因啓動子上特異核苷酸序列結合方面(miàn)的研究。該技術常與DNA芯片和分子克隆技術相結合。
1. 細胞固定
2. 染色質斷裂
3. 染色質免疫沉澱
4. 交聯反應的逆轉
5. DNA的純化
6. DNA的鑒定。
1. 貼壁細胞:用胰酶將(jiāng)細胞消化下來,或用細胞刮將(jiāng)細胞刮下來,將(jiāng)培養液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鍾,棄上清留細胞沉澱,幹冰運輸。
2. 懸浮細胞:將(jiāng)培養液1000轉/分,離心10min。棄上清留細胞沉澱,幹冰運輸。
3. 細胞上清:3000轉/分,離心15min取上清,上清立即用于實驗,或分裝後(hòu)于-20℃或-80℃保存。避免反複凍融。