激光掃描共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscopy,LSCM)是近代生物醫學(xué)圖象儀器。它是在熒光顯微鏡成(chéng)象的基礎上加裝激光掃描裝置,使用紫外光或可見光激發(fā)熒光探針。利用計算機進(jìn)行圖象處理,從而得到細胞或組織内部微細結構的熒光圖象,以及在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+、pH值、膜電位等生理信号及細胞形态的變化。
渦狀區LSCM圖像
中央區LSCM圖像
包埋→制片→拍照
以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都(dōu)不得冷凍結冰!
1. 電鏡檢測取材較爲嚴格,取材需要迅速,材料塊要小,固定液和材料比例爲10:1。使用4%多聚甲醛加少量新鮮配制的戊二醛固定,使其終濃度爲0.5%~1%。4℃保存或冰浴(條件允許,推薦)運輸至我方。
2. 外秘體囊泡等用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,遠距離-80℃凍存運輸,近距離4℃保存運輸,盡快制片及時(shí)電鏡觀察拍照。
注:將(jiāng)所取樣本盡可能(néng)固定在生活狀态下,并保存樣本的抗原活性;免疫電鏡由于GA濃度很低微細結構變化大,2h或過(guò)夜中間換液2~3次。