腺病毒(Adenovirus, ADV)是一種(zhǒng)無包膜的線性雙鏈DNA病毒,具有廣泛的細胞和組織感染能(néng)力。感染過(guò)程劇烈,适于短時(shí)間内進(jìn)行基因高表達的實驗,與其它病毒相比,腺病毒最大優勢在于插入片段較長(cháng),表達活性強。
體外應用時(shí),腺病毒載體轉基因效率高(接近100%的轉導效率),且可轉導不同類型的細胞,對(duì)于大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好(hǎo)的工具。但是,在體内應用時(shí),由于腺病毒免疫原性強,感染劇烈,故常會(huì)引起(qǐ)動物局部組織炎症反應和機體免疫反應,對(duì)動物體征和實驗結果的客觀性造成(chéng)影響。
腺病毒包裝與純化
腺病毒包裝中表達質粒與穿梭質粒共轉染293T細胞,待細胞出現CPE狀态後(hòu)通過(guò)收集和過(guò)濾細胞裂解物而純化。
CPE(Cytopathic Effect):病毒對(duì)組織培養細胞侵染後(hòu)産生的細胞變性,利用此種(zhǒng)病變效應可進(jìn)行病毒定量。
腺病毒滴度檢測
檢測方法:酶聯免疫法腺病毒滴度測定,根據計算感染後(hòu)染成(chéng)褐色的陽性細胞數,來計算病毒滴度
實驗原理:腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成(chéng)褐色
檢測方法:免疫顯色方法。
實驗原理:通過(guò)抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與感染腺病毒樣品的細胞結合,再用HRP标記的二抗與一抗結合,經(jīng)顯色液顯色,被感染的細胞變成(chéng)褐色,根據陽性細胞數,來計算病毒滴度。
腺病毒載體優勢
① 表達快,腺病毒感染細胞後(hòu),1-2天即可表達
② 載體容量大,感染效率高,常用于感染難感染的細胞
③ 不整合到染色體中,無插入緻突變性
④ 具有嗜肝性,易于感染肝細胞,腺病毒的體内應用通過(guò)是用于感染肝髒
不過(guò)由于腺病毒免疫原性高,對(duì)某些對(duì)外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成(chéng)炎症,體内應用需謹慎。
載體選擇
腺病毒産品,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。以下腺病毒載體可供您選擇:
應用實例
1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝髒]
注射部位:肝髒
載體名稱:Ad-CBS
注射方式:尾靜脈
注射量:10ul,1 x1011PFU/mL
檢測時(shí)間:1周
2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝髒]
注射部位:肝髒
載體名稱:Ad-ATG7
注射方式:尾靜脈
注射量:1 x109PFU /mice
檢測時(shí)間:10天
3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
注射部位:大鼠大腦皮層
載體名稱:Ad-FBLN
注射方式:腦立體定位注射
注射量:三種(zhǒng)不同劑量
檢測時(shí)間:7天
和元生物腺病毒的生産和指控采取了國(guó)際學(xué)術界公認的标準流程,采用二質粒系統在293細胞中進(jìn)行包裝。所獲得的病毒顆粒經(jīng)過(guò)超速梯度離心和過(guò)濾,并通過(guò)殼蛋白免疫法進(jìn)行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以滿足各類實驗的使用要求。