熒光素酶（luciferase）是自然界中能(néng)夠産生生物熒光的酶的總稱，其中最有代表性的是從甲蟲中分離得到的螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）和從海腎中分離得到的海腎熒光素酶（Renilla luciferase）。由于兩(liǎng)種(zhǒng)酶底物和發(fā)光顔色的區别，且在動物體内無内源性表達，使其在雙報告實驗中得到廣泛應用。熒光素酶作爲一種(zhǒng)理想的報告基因，可用于啓動子研究、miRNA研究、信号轉導通路研究等。
1 構建報告基因質粒的構建
2 質粒轉染細胞，篩選陽性克隆
3 報告基因質粒與轉錄因子表達質粒共轉染細胞
4 提取蛋白加入底物，測定熒光素酶的活性
5 計算相對(duì)熒光強度
1、血清樣本(幹冰運輸)
將(jiāng)收集好(hǎo)的全血，靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存（-20℃或-80℃）。
2、血漿樣本(幹冰運輸)
收集抗凝全血，輕輕颠倒充分抗凝後(hòu)，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存（-20℃或-80℃）。
3、組織樣本
取組織塊（0.1g～0.2g）最少可到2～5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭幹，準确稱重，放入5ml的勻漿管中。按重量：體積=1：9的比例加入勻漿介質或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中，冰水浴條件下，用眼科小剪盡快剪碎組織塊，進(jìn)行勻漿。將(jiāng)制備好(hǎo)的勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機2500轉/分左右，離心10～15分鍾，取上清液進(jìn)行測定。制備好(hǎo)的勻漿液建議不要凍存，最好(hǎo)當天進(jìn)行測定，如放置時(shí)間過(guò)長(cháng)相關酶活會(huì)有所下降。
4、細胞樣本
貼壁細胞：用胰酶將(jiāng)細胞消化下來，或用細胞刮將(jiāng)細胞刮下來，將(jiāng)培養液在室溫條件下1000轉/分，離心10分鍾，棄上清留細胞沉澱，幹冰運輸。
懸浮細胞：將(jiāng)培養液1000轉/分，離心10min。棄上清留細胞沉澱，幹冰運輸。
細胞上清：3000轉/分，離心15min取上清，上清立即用于實驗，或分裝後(hòu)于-20℃或-80℃保存。避免反複凍融。
