對(duì)心肌酶檢查,檢查心肌酶主要是确定心肌缺血壞死或細胞膜通透性。主要包括的項目有乳酸脫氫酶(LDH)、乳酸脫氫酶同工酶(LDH-1)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)四項。
1、樣本接收:血清、血漿、組織、細胞。
2、實驗步驟:(具體項目依據相應說(shuō)明書操作)
1、血清樣本(幹冰運輸)
將(jiāng)收集好(hǎo)的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存(-20℃或-80℃)。
2、血漿樣本(幹冰運輸)
收集抗凝全血,輕輕颠倒充分抗凝後(hòu),可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存(-20℃或-80℃)。
3、組織樣本
取組織塊(0.1g~0.2g)最少可到2~5mg在冰冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭幹,準确稱重,放入5ml的勻漿管中。按重量:體積=1:9的比例加入勻漿介質或者0.86%的生理鹽水于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,進(jìn)行勻漿。將(jiāng)制備好(hǎo)的勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機2500轉/分左右,離心10~15分鍾,取上清液進(jìn)行測定。制備好(hǎo)的勻漿液建議不要凍存,最好(hǎo)當天進(jìn)行測定,如放置時(shí)間過(guò)長(cháng)相關酶活會(huì)有所下降。
4、細胞樣本
貼壁細胞:用胰酶將(jiāng)細胞消化下來,或用細胞刮將(jiāng)細胞刮下來,將(jiāng)培養液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鍾,棄上清留細胞沉澱,幹冰運輸。
懸浮細胞:將(jiāng)培養液1000轉/分,離心10min。棄上清留細胞沉澱,幹冰運輸。
細胞上清:3000轉/分,離心15min取上清,上清立即用于實驗,或分裝後(hòu)于-20℃或-80℃保存。避免反複凍融。