CCK-8是一種(zhǒng)基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測試劑。WST-8 [化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽],是一種(zhǒng)類似于MTT的化合物,它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下,被線粒體中的脫氫酶還(hái)原爲具有高度水溶性的橙黃色甲瓒産物(formazan)。顔色的深淺與細胞增殖成(chéng)正比,與細胞毒性成(chéng)反比。
EdU(5-Ethynyl-2'-deoxyuridine)是一種(zhǒng)胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能(néng)夠在DNA複制時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在合成(chéng)的DNA分子中,基于Apollo®熒光染料與EdU的特異性反應即可直接并準确地檢測出DNA複制活性,廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長(cháng)與發(fā)育、DNA損傷修複、病毒繁殖等方面(miàn)的研究,尤其适合進(jìn)行siRNA、miRNA、小分子化合物及各種(zhǒng)藥物的細胞增殖及活力篩選實驗。
1. 接種(zhǒng)細胞懸液100μl于96孔闆,預先置于37℃,5% CO2飽和濕度培養箱内培養;
2. 每孔内加入10μl的CCK-8試劑;
3. 培養闆放培養箱内孵育1-4小時(shí);
4. 酶标儀測定450nm波長(cháng)度吸光值。
1. 細胞培養:接種(zhǒng)細胞懸液于96孔闆中,培養至正常生長(cháng)階段
2. 藥物處理:根據實驗需要進(jìn)行各種(zhǒng)藥物處理
3. EdU标記:用細胞培養基按1000:1的比例稀釋EdU溶液 (試劑A),制備适量50μM EdU培養基;
4. 細胞固定
5. Apollo染色
6. 圖像獲取及分析