血腦屏障是指腦毛細血管壁與神經(jīng)膠質細胞形成(chéng)的血漿與腦細胞之間的屏障和由脈絡叢形成(chéng)的血漿和腦脊液之間的屏障，這(zhè)些屏障能(néng)夠阻止某些物質(多半是有害的)由血液進(jìn)入腦組織。血腦屏障可使腦組織少受甚至不受循環血液中有害物質的損害，從而保持腦組織内環境的基本穩定，對(duì)維持中樞神經(jīng)系統正常生理狀态具有重要的生物學(xué)意義。
采用永生化細胞系建立的BBB模型應運而生，較爲常用的永生化内皮細胞系如小鼠bEnd3和bEnd5，豬PBMEC/C1-2和人hCMEC/D3，以及非腦細胞系如CaCo-2，MDCK-MDR1，Huvecs和ECV304等。
評價體外模型成(chéng)功與否的指标，主要基于體外模型的滲透性以及内皮細胞特定酶類的表達、緊密連接的形成(chéng)。
1. Transwell預處理：移液器吸取2%明膠溶液100μl，放入Transwell上室中，浸潤PET膜，置于37℃，5%CO2細胞孵箱靜置30min，進(jìn)行包被，用移液器吸出棄去明膠溶液，備用。
2. 體外BBB模型建立：當T25培養瓶中細胞生長(cháng)密度大于 80-90%，進(jìn)行細胞傳代。棄去培養基，加入1ml PBS 緩慢沖洗培養瓶内的細胞，重複3次。
3. 加入1ml 0.25%胰酶，完全浸潤細胞表面(miàn)，放置 37℃細胞孵箱中靜置消化 3-5min，在電子顯微鏡下觀察，當細胞形态變圓回縮後(hòu)，雙手輕輕拍打培養瓶使絕大部分細胞脫落，快速加入 5ml 細胞完全培養基終止消化。
4. 使用移液器將(jiāng) T25 培養瓶中的細胞懸液吸出至 15ml 的離心管中，離心，1000rpm，5min。使用移液器將(jiāng)離心管中上清液吸出棄去，加入細胞完全培養基重懸細胞。
5. 將(jiāng)細胞接種(zhǒng)于包被了 2%明膠的 Transwell 小室上室的 PET 膜上，加至 250ul Huvecs 細胞完全培養基。將(jiāng) C6 細胞接種(zhǒng)于 24 孔 Transwell 小室的下室，加入 C6 完全培養基至 1000ul，保持 Transwell 小室上下室之間液面(miàn)相平。設置實驗組、單細胞組及空白對(duì)照組。
6. 每天換液并定時(shí)觀察細胞的生長(cháng)情況。大約 6-8 天觀察細胞基本融合後(hòu)，進(jìn)行體外 BBB 模型評價的系列實驗。
