骨髓間充質幹細胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是存在于哺乳動物的骨髓基質中的一種(zhǒng)具有分化形成(chéng)骨、軟骨、脂肪、神經(jīng)及成(chéng)肌細胞的多種(zhǒng)分化潛能(néng)的細胞亞群。
1. 將(jiāng)5-7日齡大乳鼠處死，剝離出雙側股骨及胫骨；
2. 骨兩(liǎng)端剪口後(hòu)，1ml無菌注射器吸取DMEM反複沖洗骨髓腔；
3. 收集細胞懸液，3ml完全培養基（含10%血清）重懸細胞，接種(zhǒng)于6cm細胞培養皿中，培養箱内培養；
4. 16-24小時(shí)後(hòu)倒置顯微鏡觀察細胞貼壁情況，吸除培養基及未貼壁細胞，PBS沖洗，加入完全培養基培養細胞，培養箱内培養。
5. 三天内每日觀察細胞生長(cháng)情況并PBS沖洗、換液，後(hòu)隔日換液。
6. 細胞融高于90%時(shí)，吸除培養基，PBS沖洗，加入胰蛋白酶溶液 1ml，37°C 消化貼壁細胞2-3min；
7. 顯微鏡下觀察細胞皺縮變圓後(hòu)，加入 1ml 完全培養基終止消化。
8. 加入完全培養基重懸細胞，并接種(zhǒng)細胞于新的培養皿内，培養箱内培養。每日觀察細胞生長(cháng)情況，隔日換液。
9. 标記蛋白檢測。
