大鼠海馬神經(jīng)元細胞分離自海馬體(Hippocampus),又名海馬回、海馬區、大腦海馬,海馬體主要負責記憶和學(xué)習。海馬神經(jīng)元細胞是海馬區的主要細胞組成(chéng),主要功能(néng)是參與近期學(xué)習、情緒及内髒功能(néng)調節、是老年癡呆、癫痫等疾病的主要病竈之一。海馬神經(jīng)元細胞是研究神經(jīng)細胞生物學(xué)特性和外源幹擾因素作用的有效細胞模型。
1. 將(jiāng)培養瓶(闆)用多聚賴氨酸包被;
2. 取新生24 h的SD大鼠斷頭處死,取出全腦;
3. 以腦中線爲起(qǐ)點,小心撥開(kāi)大腦颞葉皮層,暴露出新月狀海馬回,小心取出海馬組織,剪碎組織;
4. 組織消化和計數;
5. DMEM/F12培養液重懸細胞,台盼藍染色快速計數,調整細胞終濃度爲105個/ml,接種(zhǒng)于培養瓶;
6. 換液:接種(zhǒng)後(hòu)24 h將(jiāng)培養液換成(chéng)無血清DMEM/F12培養液,第48 h時(shí)加入10 μmol/L的阿糖胞苷,以抑制非神經(jīng)元細胞的過(guò)度生長(cháng),随後(hòu)每3 d半量換液;
7. 最後(hòu)就(jiù)是标記蛋白檢測。