小鼠主動脈内皮細胞(mice aortic endothelial cells,MAEC)分離自主動脈組織;主動脈是體循環動脈的主幹。由左心室發(fā)出,起(qǐ)始部有主動脈瓣,可依次分爲升主動脈,主動脈弓和降主動脈。降主動脈又分爲胸主動脈和腹主動脈。接受左心室搏出的血液,并發(fā)出各級分支將(jiāng)血液運輸到全身各組織、器官。當主動脈病變(如主動脈瘤、主動脈瓣狹窄、主動脈破裂等)時(shí)可影響全身血液的供應。
1)貼壁細胞傳代:提前將(jiāng)培養基、PBS放入37℃水浴鍋内預熱,用75%酒精擦拭後(hòu)再放入超淨台内,吸除或倒掉細胞瓶内舊培養液,加少量PBS潤洗細胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能(néng)蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還(hái)未漂起(qǐ)時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成(chéng)細胞懸液。控制吹打的力度,避免産生大量的氣泡,將(jiāng)細胞懸液分别接種(zhǒng)到另外的2~3個細胞瓶内,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀察貼壁生長(cháng)情況。
2)懸浮細胞傳代:將(jiāng)細胞懸液轉移到無菌離心管内,1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉澱,制成(chéng)細胞懸液,將(jiāng)細胞懸液分别接種(zhǒng)到另外的2~3個細胞瓶内,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。