服務介紹:
細胞凋亡期間基因組DNA被剪切後(hòu)可能(néng)會(huì)形成(chéng)低分子量的雙鏈DNA片段或者高分子量的單鏈DNA片段,這(zhè)些受損的DNA片段斷端可通過(guò)酶反應修飾核苷酸末端3’-OH被識别。TUNEL反應可將(jiāng)凋亡與壞死及藥物和輻射誘導的DNA鏈斷裂區分開(kāi)來。
實驗結果展示:
實驗過(guò)程:
- 經(jīng)過(guò)固定及透膜後(hòu)的細胞用微球菌核酸酶(micrococcal nuclease)或重組DNA酶(Dnaseirecombinant)在15-25℃條件下孵育10 min後(hòu)再加入TUNEL反應液。
- TUNEL反應液孵育:樣品中加入50 μl新鮮配置的TUNEL反應液後(hòu)在37℃潮濕環境中避光孵育60 min,孵育完畢後(hòu)吸幹淨TUNEL反應液棄之,加入PBS輕柔沖洗3次;
- 4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色:加入配置好(hǎo)的DAPI染液于室溫下孵育10 min吸出。PBS沖洗3次後(hòu),加入沒(méi)過(guò)細胞的PBS保濕;
- 觀察和分析:光學(xué)顯微鏡下觀察。
樣本運輸要求:
石蠟切片常溫、冰凍切片-20℃、固定後(hòu)細胞爬片4℃