原位雜交的原理是含有互補序列（探針）的被标記的單鏈DNA或RNA片段在适當 的條件下與細胞的DNA或RNA雜交形成(chéng)穩定的雜交體。無論是DNA(dsDNA、寡核苷酸和ssDNA)或是RNA(SSC RNA)探針均能(néng)用于定位DNA和mRNA，并且均能(néng)用于兩(liǎng)個主要類型的标記策略：直接标記，即用報道(dào)分子（如同位素）附著(zhe)于DNA或RNA；間接标記，在該法中將(jiāng)半抗原（如生物素或地高辛）附著(zhe)于探針上，然後(hòu)用标記的結合蛋白(如親合素）檢測或者用特異性的抗體檢測靶探針雜交體
1. 組織固定：組織取出洗淨後(hòu)立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12 h。
2. 脫水：組織固定完成(chéng)後(hòu)經(jīng)梯度酒精脫水後(hòu)浸蠟，包埋。
3. 切片：石蠟經(jīng)切片機切片，攤片機撈片，62℃烤箱烤片2 h。
4. 石蠟切片脫蠟至水
5. 消化：根據組織固定時(shí)間長(cháng)短，切片于修複液中煮沸10-15min，自然冷卻。後(hòu)基因筆畫圈，根據不同組織不同指标特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37℃消化
6. 預雜交：滴加預雜交液，37°C孵育1 h。
7. 雜交：傾去預雜交液，滴加含探針雜交液, 恒溫箱37°C雜交過(guò)夜。
8. 雜交後(hòu)洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C洗10 min，1×SSC，37°C洗10 min，0.5×SSC室溫洗10 min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。
9. DAPI複染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8 min，沖洗後(hòu)滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
10. 鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長(cháng)330-380 nm，發(fā)射波長(cháng)420 nm,發(fā)藍光；FAM(488)綠光激發(fā)波長(cháng)465-495 nm，發(fā)射波長(cháng)515-555 nm，發(fā)綠光；CY3紅光激發(fā)波長(cháng)510-560 nm，發(fā)射波長(cháng)590 nm，發(fā)紅光)DAPI染核，爲藍光。
1. 冰切。标本放原位雜交固定液中，常溫運輸；冰凍切片-20°運輸。
2. 石蠟。标本放原位雜交固定液中，常溫運輸；石蠟切片常溫運輸。
3. 細胞爬片。細胞爬片加原位雜交固定液固定15 min後(hòu)，密封，4°C運輸。共聚焦皿
4. 新鮮組織：組織取出後(hòu)可以立即冷凍處理，後(hòu)幹冰運輸到武漢進(jìn)行後(hòu)續冰凍切片處理。新鮮組織-80°C保存。
