昨日，國(guó)家心血管病專家委員會(huì)血管外科專業委員會(huì)的專家學(xué)者發(fā)布了《遺傳性胸主動脈瘤/夾層基因檢測及臨床診療專家共識》，旨在闡述基因檢測在遺傳性胸主動脈病診斷及篩查中的作用，以及明确診斷後(hòu)針對(duì)各種(zhǒng)類型胸主動脈病患者提出醫療和生活方式管理方面(miàn)的建議。共識一經(jīng)發(fā)出，引起(qǐ)關注此類疾病同行朋友們的熱烈讨論，本文就(jiù)共識中一些大家較關注的點做一些分析。（詳細共識解讀請查看：《遺傳性胸主動脈瘤/夾層基因檢測及臨床診療專家共識》）
病史采集及臨床診斷建議中提出，建議詳細采集患者個人臨床信息和家族史。因爲胸主動脈瘤患者通常無症狀，直到突發(fā)急性主動脈并發(fā)症才緊急就(jiù)醫，很多時(shí)候已經(jīng)錯過(guò)最佳預防及治療期。提前了解患者基因信息，做好(hǎo)預防性措施，可以起(qǐ)到防範于未然的作用。
臨床治療及随訪檢查建議中提出，主動脈患者何時(shí)進(jìn)行藥物和手術治療，除依據患者的病理指征外，不同基因突變導緻的不同亞型的主動脈病兇險程度有差異，對(duì)于主動脈手術時(shí)機的選擇也具有一定指導意義。同時(shí)，針對(duì)不同基因背景和個體因素的胸主動脈病患者，需要選擇合适的預防性手術指征，以及合适的監測、随訪周期及檢查方式。
在遺傳學(xué)檢測及家系篩查建議中提出，對(duì)遺傳性主動脈病患者進(jìn)行基因檢測，一方面(miàn)可在患者症狀表現完全之前明确診斷，另一方面(miàn)也可提示疾病的臨床特征，指導幹預時(shí)機、治療方案及預後(hòu)管理。依據先證者的基因檢測結果，對(duì)家系成(chéng)員進(jìn)行特定位點篩查，具有輔助診斷、症狀前幹預及預後(hòu)判斷等作用。多項專家共識都(dōu)闡述了基因檢測在主動脈病診斷、治療及管理中的重要作用，并提供了具體的指導方案，見圖。
根據專家共識建議，主動脈疾病相關基因突變的檢測對(duì)于主動脈疾病的治療具有極其重要和關鍵的作用。
在前期市場調研中我們了解到這(zhè)類疾病基因檢測的市場需求，并與相關專家共同開(kāi)發(fā)了一款遺傳性主動脈疾病基因檢測試劑盒，包含18個主動脈疾病相關基因的編碼區，覆蓋剛發(fā)布的共識中10個檢測至少要包含的核心基因，并覆蓋7個可以包含的基因，爲客戶提供一個較爲全面(miàn)的主動脈疾病基因檢測解決方式。（産品詳情請點擊：VariantPro遺傳性主動脈疾病（Heritable Aortic Disease ）Panel介紹）
遺傳性主動脈疾病基因檢測Panel基本性能(néng)
針對(duì)13種(zhǒng)遺傳性主動脈疾病：馬凡綜合征、Loeys-Dietz綜合征、Ehlers-Danlos綜合征、先天性攣縮性蜘蛛指綜合征、Shprintzen-Goldberg綜合征、家族性胸主動脈瘤/夾層等
18個基因的編碼區：SKI、TGFB2、COL5A2、COL3A1、TGFBR2、MYLK、FBN2、COL5A1、TGFBR1、NOTCH1、PRKG1、ACTA2、KIAA1279、FBN1、SMAD3、MYH11、SMAD4、SLC2A10
Panel Size：68.08kb
方法學(xué)： NGS法
采用技術：VariantProTM一步式捕獲建庫方法
适配平台：Illumina NextSeq, MiSeq, MiniSeq, HiSeq2000/2500/3000/4000/X, NovaSeq
測序模式：PE150
擴增子覆蓋度：99.61%
DNA需求量：100-200ng
操作時(shí)間：捕獲建庫手動操作時(shí)間20分鍾左右；PCR時(shí)間6-8小時(shí)；上機前文庫純化時(shí)間60分鍾左右
富集特異性：90±5%
擴增子均一性：90±5% at 0.2×mean coverage
測序數據量與覆蓋深度
擴增子均一性：90±5%at 0.2×mean coverage
困難擴增子分析
#418擴增子（394bp）高GC；#77擴增子（410bp）低GC，重複區域，存在polyA。以上兩(liǎng)個擴增子擴增困難。#55擴增子（400bp）局部低GC，增加數據量可以提高覆蓋度。
根據《單基因遺傳性心血管疾病基因診斷指南》（2019版），NGS無法捕獲的區域，可以用sanger測序進(jìn)行補測。試劑盒中總計2個擴增子，合計170bp區域難以捕獲，可以用2個反應sanger測序補測。
VariantPro™一步式多重PCR方法
1.提升特異性——omega primer需要3p臂和5p臂同時(shí)特異結合模闆，理論特異性提升超過(guò)26,000倍。
2.寬容模闆變異——5p arm的長(cháng)度基本達到35bp以上，允許引物最大程度的錯配能(néng)力。
3.降低引物二聚體的形成(chéng)——OmegaPrimer中負責特異性擴增的3p arm在（15-17nt），減少了引物二聚體形成(chéng)的可能(néng)性。
4.容納更長(cháng)的真實序列——相較于傳統多重PCR引物，OmegaPrimer中引物所占擴增子區域減小，有效序列比例提高。
通用引物與特異性引物一起(qǐ)加入PCR反應管中，隻需一個PCR體系即可完成(chéng)靶向(xiàng)序列捕獲到測序文庫制備全過(guò)程。無需開(kāi)管、閉管、轉管操作，最大程度減少實驗室外部污染，最大限度避免人工操作可能(néng)引入的錯誤和系統誤差。
參考文獻
1.國(guó)家心血管病專家委員會(huì)血管外科專業委員會(huì). 遺傳性胸主動脈瘤/夾層基因檢測及臨床診療專家共識. 中國(guó)循環雜志，2019, 34: 319-325.
2.ErbelR, AboyansV, BoileauC,et al. 2014 ESC Guidelines on the diagnosis and treatment of aortic diseases:Document covering acute and chronic aortic diseases of the thoracic and abdominal aorta of the adult TheTask Force for the Diagnosis and Treatment of Aortic Diseasesof the European Society of Cardiology (ESC). Eur Heart J, 2014, 35: 2873-2926.
3.楊航等.遺傳性主動脈疾病基因檢測的應用.中國(guó)循環雜志2016 年3月第31卷第3期（總第213期）
4.中華醫學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì),精準心血管病學(xué)學(xué)組,中國(guó)醫療保健國(guó)際交流促進(jìn)會(huì),精準心血管病分會(huì)中華心血管病雜志編輯委員會(huì).單基因遺傳性心血管疾病基因診斷指南[J],中華心血管病雜志2019年3月第47卷第3期
如需了解更多産品詳情，歡迎電聯：0571-87662413，郵箱：market@lc-bio.com。
VariantBaits™ Target Enrichment System
液相雜交捕獲系統
基于自主知識産權μParaflo® 微流體芯片平台合成(chéng)RNA捕獲探針，采用液相雜交技術捕獲靶标DNA，使用生物素标記探針誘餌，探針序列與靶向(xiàng)序列互補，完成(chéng)靶向(xiàng)序列文庫的富集與制備。可用于從小到大規模的基因捕獲，容忍某些局部模闆的變異。
VariantPro™ One-Step Multiplex PCR System
一步式多重PCR建庫系統
經(jīng)過(guò)LC Sciences科學(xué)家兩(liǎng)年潛心攻關，于2015年成(chéng)功研發(fā)出VariantPro™一步式多重PCR建庫系統，在目标區域進(jìn)行引物設計，通過(guò)多重PCR的方式進(jìn)行目标區域擴增，通常不受引物間模闆變異的影響。文庫制備可簡化成(chéng)一步，人工操作時(shí)間僅5分鍾，可用于小到中規模的基因捕獲。
